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產品名稱:Y187菌株(ZK283)

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ZK283 0.3ml/支 580 - + 有貨

■ 產品介紹

Y187菌株是Clontech公司開發的GAL4系統酵母單雜,雙雜實驗用菌株,MATα型,可直接轉化質粒或與MATa型酵母菌株(Y2HGold,AH109等)通過mating操作進行篩庫試驗。,Transformation  marker為: trp1, leu2,報告基因為:lacZ, MEL1。Y187 -GAL4酵母雙雜系統需要兩種質粒配套使用:PGBKT7和PGADT7。質粒PGBKT7的篩選標志為TRP1,用于表達DNA-BD(來自酵母轉錄因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白;質粒PGADT7的篩選標志為LEU,用于表達AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)與目標蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4系統原理:一個完整的酵母轉錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個結構域:位于N端1 ~ 174位氨基酸區段的DNA結合域(DNA-BD)和位于C端768 ~881 位氨基酸區段的轉錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并與之結合。而AD可以啟動UAS下游的基因進行轉錄。BD和AD單獨存在不能激活轉錄,但當二者接近時,則呈現完整的GAL4活性,使含有UAS的啟動子下游基因轉錄表達。正常條件下,BD不與AD結合,將要檢測的蛋白質分別與BD和AD融合,形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和 prey 融合蛋白(prey-AD),如果 bait 和 prey發生相互作用,就會促使 BD 和 AD 的相互接近,形成完整的GAL4,從而激活報告基因的轉錄。Y187有兩個報告基因:lacZ, MEL1,分別由兩種不同的啟動子(G1,M1)啟動,這兩種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區相同,其余部分均不同,大大降低了酵母雙雜假陽性發生的概率。Y187菌株可用YPDA在28℃有氧的條件下培養,使用30%的甘油保藏菌種。

基因型為:MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101,  trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met-, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ, MEL1


■ 基本信息

培養基:YPD/YPDA

菌株類別:酵母雜交菌

培養條件:28℃,有氧,YPD/YPDA

質粒轉化:PEG/liAC;化轉/電轉

保存方式:30%甘油,-80℃

基本應用:酵母雙雜交


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